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　　HP-PRRSV GD株强弱毒株抗原在感染猪体内的动态分布研究.pdf

　　高致病性猪繁殖与呼吸综合征HIGHLYPATHOGENICPORCINEREPRODUCTIVEANDRESPIRATORYSYNDROME,HPPRRS是由美洲型PRRSV高致病性变异毒株引起的一种急性高致死性疫病,自2006年爆发以来,给我国养殖业造成了非常严重的经济损失。近年来,国内新爆发和流行的高致病性PRRS,主要以高热、流产、高发病率和高死亡率为特征,是目前影响我国养猪业发展最重要的疾病之一。目前,病毒基因亚型及血清型很多,同种但是不同致病力的病毒可以引起宿主靶细胞产生不同的应答反应。传统灭活苗的保护力往往十分有限,不能达到预防HPPRRSV的效果。而新型弱毒疫苗保护的毒株和猪场的毒株不一定能形成交叉保护,即使基因型差异很小,这是当前防控PRRS的最大难题。因此进一步研究开发新型PRRS疫苗并制定出更加合理的防控方案对我国养猪产业意义重大。本实验通过比较几株美洲株序列,选取ORF6和ORF7阅读框内保守区域,设计引物和探针,建立RTPCR方法和TAQMAN荧光定量PCR检测方法,结果显示特异性、敏感性均良好,荧光定量PCR方法比普通PCR方法敏感10100倍作用。通过建立的RTPCR方法和TAQMAN荧光定量检测方法研究本实验室培育的弱毒疫苗株GDR180株和强毒GD株F5代在感染40日龄仔猪后抗原在猪组织器官中的分布情况,以比较强弱毒株的组织嗜性差异,从而进一步揭示弱毒疫苗株的致病特性变化机理。结果显示强弱毒株在组织和器官中的分布情况差异显著,分布范围以及持续存留时间也有较大的不同。强毒株在第2周之前抗原分布范围最广,第2周之后分布范围明显减少；相对于强毒株而言,弱毒株感染后在组织中出现时间相对滞后,带毒时间主要集中在第2周至第3周之间,在第5周完全消失。从分布范围来看,强毒株的组织嗜性范围较广,而弱毒株仅限于肺脏及淋巴结等组织。说明强毒株在细胞传代过程中毒力下降的同时,组织嗜性的范围也明显缩小,这可能是病毒与细胞的长期相互适应有关。本实验对弱毒株GDR180不同免疫剂量刺激产生PRRSV抗体产生结果进行了检测,虽然用ELISA方法检测的是针对N蛋白的抗体,没有中和病毒的作用,但是与猪体内的免疫反应有很大相关性。对最佳免疫剂量的选择具有重要意义,但最佳的免疫剂量还有待于进一步的试验来确定。

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